化妝品皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)流程及合規(guī)要求

11次 2025.10.17

　　化妝品皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)（即過敏測試）是評(píng)估化妝品安全性、預(yù)防過敏反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。通過模擬人體皮膚接觸化妝品后的免疫反應(yīng)，判斷產(chǎn)品是否可能引發(fā)接觸性皮炎、紅腫、瘙癢等過敏癥狀，確保產(chǎn)品在正常使用下不會(huì)對(duì)消費(fèi)者造成健康風(fēng)險(xiǎn)。?


化妝品皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)


　　化妝品皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)流程


　　（1）試驗(yàn)動(dòng)物選擇與分組


　　動(dòng)物模型：優(yōu)先選用雌性CBA/J小鼠（6-8周齡，體重18-22g），該品系對(duì)致敏物質(zhì)反應(yīng)敏感，試驗(yàn)重復(fù)性好；


　　分組要求：每組至少5只小鼠，分為“試樣組（3個(gè)劑量）”“溶劑對(duì)照組（僅含溶劑）”“陽性對(duì)照組（如2,4-二硝基氯苯DNCB，已知強(qiáng)致敏劑）”，確保各組動(dòng)物體重、健康狀態(tài)無顯著差異。


　　（2）致敏接觸（誘導(dǎo)階段）


　　方式：將制備好的試樣通過“局部涂抹”方式接觸小鼠耳廓（每只小鼠每側(cè)耳廓涂抹20μL，連續(xù)涂抹3天，每天1次），模擬化妝品日常接觸場景；


　　注意事項(xiàng)：涂抹時(shí)避免損傷耳廓皮膚，若試樣易揮發(fā)，需在涂抹后用保鮮膜短暫覆蓋（不超過4h），確保有效接觸。


　　（3）增殖檢測（激發(fā)階段）


　　同位素標(biāo)記：在末次致敏后第5天，給每只小鼠腹腔注射3H-胸腺嘧啶核苷（3H-TdR，一種DNA合成標(biāo)記物），劑量為74kBq/只；


　　淋巴細(xì)胞分離：注射后5h，處死小鼠并分離雙側(cè)耳廓淋巴結(jié)，研磨成單細(xì)胞懸液，通過離心去除細(xì)胞碎片，保留淋巴細(xì)胞；


　　放射性檢測：用液體閃爍計(jì)數(shù)器測量淋巴細(xì)胞的放射性強(qiáng)度（cpm值），計(jì)算“刺激指數(shù)（SI）”——試樣組cpm值與溶劑對(duì)照組cpm值的比值，SI值越高，說明淋巴細(xì)胞增殖越顯著，致敏風(fēng)險(xiǎn)越高。


　　（4）結(jié)果觀察與記錄


　　指標(biāo)記錄：除放射性強(qiáng)度外，需同步觀察小鼠耳廓是否出現(xiàn)紅腫、增厚（可通過卡尺測量耳廓厚度），排除刺激反應(yīng)干擾；


　　數(shù)據(jù)整理：計(jì)算每組小鼠的SI均值，若某劑量組SI≥3.0，且存在劑量-反應(yīng)關(guān)系，則判定該試樣具有致敏性。


　　化妝品皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)合規(guī)要求


　　不同國家地區(qū)對(duì)化妝品皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)的法規(guī)要求存在差異，企業(yè)需根據(jù)目標(biāo)市場選擇符合要求的試驗(yàn)方法，避免因合規(guī)問題導(dǎo)致產(chǎn)品上市延誤。中國合規(guī)要求如下：


　　1、試驗(yàn)方法認(rèn)可


　　動(dòng)物試驗(yàn)：認(rèn)可《化妝品安全技術(shù)規(guī)范（2022年版）》中規(guī)定的“豚鼠最大化試驗(yàn)”“局部淋巴結(jié)試驗(yàn)”，試驗(yàn)機(jī)構(gòu)需具備CMA（檢驗(yàn)檢測機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定）和CNAS（實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可）資質(zhì)；


　　體外替代試驗(yàn)：目前已將“h-CLAT法”“MUTZ-3細(xì)胞試驗(yàn)法”納入《化妝品體外替代試驗(yàn)方法驗(yàn)證指南》，可作為動(dòng)物試驗(yàn)的補(bǔ)充，但暫未完全替代動(dòng)物試驗(yàn)（新原料仍需提供動(dòng)物試驗(yàn)數(shù)據(jù)）。


　　2、報(bào)告提交要求


　　新原料注冊/備案：需提交由資質(zhì)機(jī)構(gòu)出具的完整致敏試驗(yàn)報(bào)告，明確致敏性結(jié)論（如“未觀察到致敏反應(yīng)的劑量（NOEL）”）；


　　成品備案：含香精、防腐劑等高危成分的產(chǎn)品，需在備案資料中上傳致敏試驗(yàn)摘要，若使用已備案原料，可引用原料的致敏性數(shù)據(jù)（需注明原料備案號(hào)）。


　　3、禁止性規(guī)定


　　不得使用“化妝品禁用原料”開展試驗(yàn)；


　　禁止采用不符合倫理要求的動(dòng)物試驗(yàn)方法（如未經(jīng)批準(zhǔn)的非標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物模型）。