胍類消毒劑病毒滅活效果驗證方法步驟

36次 2025.09.26

　　胍類消毒劑作為一類廣譜、低毒的陽離子表面活性劑類消毒劑，憑借其對細菌、真菌及部分病毒的殺滅能力，以及對人體刺激性小、腐蝕性低的優(yōu)勢，廣泛應用于醫(yī)療環(huán)境、食品加工車間、公共衛(wèi)生場所及家庭日常消毒等場景。然而，胍類消毒劑的病毒滅活效果受其種類、濃度、作用時間、環(huán)境條件等因素影響較大，若效果不達標，可能導致病毒傳播風險。因此，科學開展胍類消毒劑病毒滅活效果驗證，既是保障消毒質量的關鍵，也是防范病毒擴散的重要環(huán)節(jié)。


胍類消毒劑病毒滅活效果驗證


　　胍類消毒劑病毒滅活效果驗證方法步驟


　　（1）制備病毒懸液


　　將試驗病毒株接種至敏感細胞，在37℃、5%CO?培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至細胞出現(xiàn)明顯病變（CPE），收集病毒培養(yǎng)液，經(jīng)離心去除細胞碎片后，測定病毒滴度，用無菌PBS將病毒懸液稀釋至所需濃度，確保染毒量滿足試驗要求。


　　（2）模擬染毒與有機物干擾


　　取無菌載體，每片滴加0.05mL病毒懸液，置于生物安全柜中自然干燥，模擬物體表面被病毒污染的場景；若需模擬有機物干擾，則在滴加病毒懸液前，先滴加0.05mL有機物干擾物，干燥后再滴加病毒懸液。


　?。?）消毒處理


　　將染毒后的載體放入無菌離心管中，按驗證方案加入一定體積的胍類消毒劑稀釋液，確保消毒劑完全覆蓋載體，置于設定溫度下，作用規(guī)定時間。同時設置對照組：


　　空白對照組：僅加病毒懸液，不加消毒劑；


　　中和劑對照組：加病毒懸液+中和劑，驗證中和劑對病毒無毒性；


　　載體對照組：僅加載體+消毒劑+中和劑，驗證載體、消毒劑對細胞無毒性。


　?。?）病毒回收與中和


　　到達設定作用時間后，立即向離心管中加入過量中和劑，振蕩混勻后靜置10分鐘，徹底終止消毒反應；隨后用無菌PBS稀釋回收液，用于后續(xù)病毒滴度測定。


　?。?）病毒滴度測定：


　　采用TCID??法測定回收液中的病毒滴度：將不同稀釋度的回收液分別接種至96孔細胞培養(yǎng)板（每孔100μL），每個稀釋度設置4-8個復孔，同時加入敏感細胞懸液（每孔100μL），置于37℃、5%CO?培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7天，每天觀察細胞病變情況，記錄出現(xiàn)病變的孔數(shù)，采用Reed-Muench法計算病毒滴度（TCID??/mL）。


　?。?）結果判定：


　　根據(jù)病毒滴度計算胍類消毒劑對病毒的殺滅對數(shù)值（KL），公式為：


　　KL=lg（對照組病毒滴度）-lg（消毒組病毒滴度）


　　結合驗證依據(jù)的標準要求判定結果：


　　對于用于普通物體表面消毒的胍類消毒劑，若對包膜病毒的殺滅對數(shù)值≥4.0，對無包膜病毒的殺滅對數(shù)值≥3.0，判定為病毒滅活效果合格；


　　對于用于醫(yī)療關鍵器械消毒的胍類消毒劑（如口腔器械），需達到更高要求，對包膜病毒和無包膜病毒的殺滅對數(shù)值均需≥5.0；


　　若對照組病毒滴度低于10?TCID??/mL（說明病毒活性不足），或中和劑對照組病毒滴度下降≥1.0lg（說明中和劑對病毒有毒性），則試驗無效，需重新開展。