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今日更新質(zhì)粒圖譜（一分鐘教你讀懂質(zhì)粒圖譜）

2022-04-29 08:00:37 行業(yè)快訊 來源：
導(dǎo)讀 目前大家應(yīng)該是對質(zhì)粒圖譜（一分鐘教你讀懂質(zhì)粒圖譜?。┍容^感興趣的，所以今天好房網(wǎng)小編CC就來為大家整理了一些關(guān)于質(zhì)粒圖譜（一分鐘教你
目前大家應(yīng)該是對質(zhì)粒圖譜（一分鐘教你讀懂質(zhì)粒圖譜?。┍容^感興趣的，所以今天好房網(wǎng)小編CC就來為大家整理了一些關(guān)于質(zhì)粒圖譜（一分鐘教你讀懂質(zhì)粒圖譜?。┓矫娴南嚓P(guān)知識來分享給大家，希望大家會(huì)喜歡哦。

質(zhì)粒圖譜（一分鐘教你讀懂質(zhì)粒圖譜！）

質(zhì)粒圖譜為質(zhì)粒DNA序列的物理圖譜，提供了包括質(zhì)粒的大小、篩選標(biāo)記、克隆位點(diǎn)、轉(zhuǎn)錄及翻譯元件等信息，為我們選擇質(zhì)粒、了解質(zhì)粒特點(diǎn)及應(yīng)用提供了重要依據(jù)。對于初學(xué)者來說改如何去閱讀質(zhì)粒圖譜呢？今天來給大家講解一下如何閱讀質(zhì)粒圖譜，底部還有質(zhì)粒、酶切切點(diǎn)選擇的相關(guān)教學(xué)視頻。

質(zhì)粒的組成要素有哪些

復(fù)制起始位點(diǎn)：Ori 即控制復(fù)制起始的位點(diǎn)。原核生物 DNA 分子中只有一個(gè)復(fù)制起始點(diǎn)。而真核生物 DNA 分子有多個(gè)復(fù)制起始位點(diǎn)。

抗生素抗性基因：可以便于加以檢測，如 Amp+ ,Kan+。

多克隆位點(diǎn)MCS：克隆攜帶外源基因片段。

P/E 啟動(dòng)子/增強(qiáng)子

Terms 終止信號

加poly（A）信號：可以起到穩(wěn)定 mRNA 作用

一分鐘教你讀懂質(zhì)粒圖譜！

如何閱讀質(zhì)粒圖譜

第一步：首先看 Ori 的位置，了解質(zhì)粒的類型（原核/真核/穿梭質(zhì)粒）。

第二步：再看篩選標(biāo)記，如抗性，決定使用什么篩選標(biāo)記。

Ampr 水解 β－內(nèi)酰胺環(huán)，解除氨芐的毒性。

tetr 可以阻止四環(huán)素進(jìn)入細(xì)胞。

camr 生成氯霉素羥乙?；苌铮怪ザ拘?。

neor（kanr） 氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶 使 G418（長那霉素衍生物）失活。

hygr 使潮霉素 β 失活。

第三步：看多克隆位點(diǎn)（MCS）。

它具有多個(gè)限制酶的單一切點(diǎn)。便于外源基因的插入。如果在這些位點(diǎn)外有外源基因的插入，會(huì)導(dǎo)致某種標(biāo)志基因的失活，而便于篩選。決定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。

第四步：再看外源 DNA 插入片段大小。

質(zhì)粒一般只能容納小于 10 Kb 的外源 DNA 片段。一般來說，外源 DNA 片段越長，越難插入，越不穩(wěn)定，轉(zhuǎn)化效率越低。

第五步：是否含有表達(dá)系統(tǒng)元件，即啟動(dòng)子－核糖體結(jié)合位點(diǎn)－克隆位點(diǎn)－轉(zhuǎn)錄終止信號。

這是用來區(qū)別克隆載體與表達(dá)載體。克隆載體中加入一些與表達(dá)調(diào)控有關(guān)的元件即成為表達(dá)載體。選用那種載體，還是要以實(shí)驗(yàn)?zāi)康臑闇?zhǔn)繩。

啟動(dòng)子－核糖體結(jié)合位點(diǎn)－克隆位點(diǎn)－轉(zhuǎn)錄終止信號

啟動(dòng)子－促進(jìn) DNA 轉(zhuǎn)錄的 DNA 順序，這個(gè) DNA 區(qū)域常在基因或操縱子編碼順序的上游，是 DNA 分子上可以與 RNApol 特異性結(jié)合并使之開始轉(zhuǎn)錄的部位，但啟動(dòng)子本身不被轉(zhuǎn)錄。

增強(qiáng)子/沉默子－為真核基因組（包括真核病毒基因組）中的一種具有增強(qiáng)鄰近基因轉(zhuǎn)錄過程的調(diào)控順序。其作用與增強(qiáng)子所在的位置或方向無關(guān)。即在所調(diào)控基因上游或下游均可發(fā)揮作用。/沉默子－負(fù)增強(qiáng)子，負(fù)調(diào)控序列。

核糖體結(jié)合位點(diǎn)/起始密碼/ SD 序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA 有核糖體的兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，對于原核而言是 AUG（起始密碼）和 SD 序列。

轉(zhuǎn)錄終止順序（終止子）/翻譯終止密碼子：結(jié)構(gòu)基因的最后一個(gè)外顯子中有一個(gè) AATAAA 的保守序列，此位點(diǎn) down－stream 有一段 GT 或 T 富豐區(qū)，這 2 部分共同構(gòu)成 poly（A）加尾信號。結(jié)構(gòu)基因的最后一個(gè)外顯子中有一個(gè) AATAAA 的保守序列，此位點(diǎn) down－stream 有一段 GT 或 T 富豐區(qū)，這 2 部分共同構(gòu)成 poly（A）加尾信號。

第六步：質(zhì)粒圖譜上的箭頭。

有的箭頭順時(shí)針有的箭頭逆時(shí)針，那其實(shí)是代表兩條 DNA 鏈，即質(zhì)粒是環(huán)狀雙鏈 DNA，它的啟動(dòng)子等在其中一條鏈上，而它的抗性基因在另一條鏈上。

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