網(wǎng)站首頁 手機 > 正文
每日小編都會為大家?guī)硪恍┲R類的文章，那么今天小編為大家?guī)淼氖莄ck8實驗步驟方面的消息知識，那么如果各位小伙伴感興趣的話可以，認真的查閱一下下面的內(nèi)容哦。
1、一. 制作標準曲線（測定細胞具體數(shù)量）1、首先用細胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量，然后接種細胞到培養(yǎng)板內(nèi)。2、按照比例（例如：1/2比例）依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做3-5個細胞濃度梯度，每個濃度建議3-6個復孔。3、接種后培養(yǎng)2-4小時使細胞貼壁，然后加CCK試劑培養(yǎng)一定時間后測定OD值，制作出一條以細胞數(shù)量為橫坐標（X軸），OD值為縱坐標（Y軸）的標準曲線。根據(jù)此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞的數(shù)量（使用此標準曲線的前提是實驗的條件必須要一致，便于確定細胞的接種數(shù)量以及加入CCK后的培養(yǎng)時間。）
2、
3、二. 細胞活性檢測1、在96孔板中接種細胞的懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)一段時間（37℃,5% CO2）。2、向每孔加入10 μL CCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡）3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。
4、
5、4、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。5、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定，吸光度并不會發(fā)生改變。
6、
7、三. 細胞增殖-毒性檢測1、在96孔板中配置100μL的細胞懸液。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱預培養(yǎng)24小時（37℃，5% CO2）。2、向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測物質。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當?shù)臅r間（例如：6、12、24或48小時）。
8、
9、4、向每孔加入10μL CCK溶液（注意不要再孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。6、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。7、若暫時不測定OD值，就可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。
10、
11、總結
12、1.白細胞可能需要培養(yǎng)較長時間。2.當使用標準96孔板時，貼壁細胞的最小接種量至少為1,000 個/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500 個/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。如果要使用24孔板或6孔板實驗，請先計算每孔相應的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK溶液。3.如果沒有450nm的濾光片，就可以使用吸光度在430-490 nm之間的濾光片，但是450nm濾光片的檢測靈敏度最高。
本文到此結束，希望對大家有所幫助。
版權說明： 本文由用戶上傳，如有侵權請聯(lián)系刪除！
猜你喜歡：
- 2022-09-20 斯巴魯大燈清洗開關在哪（大燈清洗開關在哪）
- 2022-09-20 長期服用竹鹽的危害（竹鹽對身體有害處嗎）
- 2022-09-20 凝聚力是什么意思向心力（凝聚力是什么）
- 2022-09-20 qq安全中心找回密碼步驟（qq安全中心找回密碼）
- 2022-09-20 無棣怎么讀音（棣怎么讀）
- 2022-09-20 代購是怎么找的客戶源（代購貨源怎么找）
- 2022-09-20 人在廣東漂泊十年歌詞（人在廣東已經(jīng)漂泊十年是什么歌的歌詞）
- 2022-09-20 釣鯉魚用丸九什么餌料最好（幾個釣鯉魚常用的丸九魚餌配方）
最新文章：
- 2023-06-30 小龍蝦清洗怎么快又干凈（龍蝦怎么快速清洗 清洗龍蝦的方法）
- 2023-06-30 簡約現(xiàn)代的陽臺吊頂裝修用材料有哪些（休閑陽臺吊頂材料有哪些）
- 2023-06-30 蘑菇怎么清洗泥沙（蘑菇怎么清洗）
- 2023-06-30 王羲之的書法對聯(lián)（王羲之最美10幅對聯(lián)）
- 2023-06-30 人類有信息素味道嗎（人類存在信息素嗎）
- 2023-06-30 對老師的感謝語20字（對老師的感謝語）
- 2023-06-30 食品安全知識內(nèi)容培訓（食品安全知識內(nèi)容）
- 2023-06-30 五一勞動節(jié)文案幽默（五一勞動節(jié)文案）
- 2023-06-30 合作共贏精彩語句八個字（簡短哀悼語八個字）
- 2023-06-30 中國的唐代建筑哪去了（中國唯一唐朝建筑）
- 2023-06-30 生死恨由京劇是主演（生死恨由誰主演京劇名家）
- 2023-06-30 了解戰(zhàn)國歷史看什么書（了解歷史看什么書）
- 2023-06-30 七創(chuàng)社出了哪些游戲（七創(chuàng)社還有什么動畫片）
- 2023-06-30 流浪地球講述的是什么故事（流浪地球講了什么故事）
- 2023-06-30 漂亮的主婦和健身教練是第幾集（漂亮主婦在家和教練是哪集）
- 2023-06-30 張仲景的傷寒雜病論并注明了什么（張仲景的傷寒雜病論并著述了什么）